发信人: repair (小和尚), 信区: Biology
标 题: Re: 讨论一个蛋白奇怪的多聚现象
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 14 07:11:00 2006), 转信

看来,你是让它胞外分泌了,如果是我,我愿意看看胞内表达时是否仍然如此,不然,可能是
胞外和膜附近的还原条件不一样,导致的artifical results
如果胞内表达也如此,还需要找个内源表达这个蛋白的细胞看看,是否仍然如此,不然,可能
是过表达导致的.
如果内源表达还如此,那就更方便了,还可以做IP再confirm一下,不然,可能是没有DTT的
时候,其它蛋白聚集再介导你的蛋白聚集.接着还可以做FRET看看,10nm的分辨率很说明
问题
以上结果都positive了,到那个时候再兴奋也不迟:)
还是那句话,先在生理条件下确定有这个现象再继续,个人感觉.
一般膜相关的蛋白聚集在一起,都会有很重要的功能要执行,good luck

【 在 beaglesci (beagle) 的大作中提到: 】
: 我做了2种情况的测试,一种是小量纯化后的结果和直接用medium跑胶,我跑胶的时候样
: 品里面加DTT或者不加DTT做了对照.medium的结果和小量纯化(from 200ml medium)的结
: 果是一致的,而且,蛋白是可溶的.现在我最关心的问题是这个oligomer形式是否稳定均
: 一的.Anyway,我觉得对cys定点突变的方法也是一个考虑,反正做起来�