发信人: yinqy (yin), 信区: Biology
标 题: Re: 怎么测peptide的concentration?
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Sep 26 12:58:16 2006)

1.用天平称：常见实验室天平精度到+/-0.1mg；假设你的肽分子量2k左右，称量精度则
为+/-50nmol；这应该是目前比较实际可行的，确定绝对量的最好结果。pmol的肽是称
不出来的。你说的情况(到处乱飞)应该不是肽本身的问题（比如0.1mg的NaCl就不会乱
飞)；而是肽的疏水性造成的。由于肽和装样品的容器之间的静电作用，很难控制称量
过程微小颗粒的飞散。市场上有去静电枪(anti static gun)卖,可以帮助改善这个过程。

2.计算浓度：上述称重得到的质量包括盐，合成肽一般都是以某种盐的形式纯化干燥，
计算肽的浓度要考虑这点。提供商一般都会做纯度检测，HPLC或者氨基酸分析是最常见
的，可以用来折算含量。

3.测量浓度：如果需要准确定量，前面帖子的nanodrop用来测量不错，但要注意你的肽
是否有tryptophan和tryrosine(280nm, 275nm吸收）。可以根据两者的molar
extinction coefficient和在肽中的残基数计算浓度。如果你不是微量或痕量应用，一
般的uv也可以了。另外注意缓冲和溶剂对uv吸收的影响很大。这个方法需要很好的对照。

如果你的应用是微量或痕量的，一般先配置高浓度stock,然后稀释。注意考虑稀释操作
的精确性和容器壁对痕量肽的吸附作用。

4.溶解和保存：如果知道组成，可以根据氨基酸情况适当加酸加碱（sigma应该有很好
的manual），疏水的加有机溶剂。防止氧化，前面提到的还原剂也很重要。溶解和稀释
过程中氧化的问题往往大于变性。
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