发信人: royluo (roy), 信区: Biology
标 题: Re: 请教Western Blot中block的一个问题
发信站: The unknown SPACE (Sat Dec 14 01:32:39 2002), 站内信件

一个小问题：阳性对照是提纯了单一蛋白还是和你样品一
样的WCL？
如果是单一蛋白，我不知道怎么解释。如果是WCL，我觉得
是你的二抗坏了。二抗坏了的时候与样品中的蛋白有很多非特
异性的结合。封闭剂对这个有影响，但不同的封闭剂影响
不一样。所以你看到不同大小的带，但是都是非特异性结合，
我觉得肯定不是你要看到的蛋白。
建议换换二抗，用新鲜一点的。

【 在 fred (寻车中) 的大作中提到: 】
: 想在CL中检测一种蛋白，理论上该蛋白的单体分子量是130KD，用Santa
: Cruz的单抗做western (Santa Cruz的Catalog上有用这种单抗做的western的结果照片）
: ，并用Santa Cruz的阳性对照，发现当用Milk block时，最强的带在70KD左右（样品和阳
: 性对照在同一位置，70KD以上的带就几乎看不到），而用Gelatin
: block时，最强的带200KD左右（样品和阳性对照也在同一位置，70KD左右的带几乎看不到
: ），为什么用不同的block会得到如此不同的结果？而且知道有实验室用同样的抗体，用M
: ilk做出来的结果是130KD左右。
: 已验证整个实验系统是正常的，因为做其它的蛋白是正常的。分子量Marker也没问题，而
: 且用了两种不同公司的Marker。


--
※ 来源:．The unknown SPACE bbs.mit.edu．[FROM: 129.49.]