发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: Re: Co-IP求助。
发信站: The unknown SPACE (Sun Apr 20 03:29:36 2003), 站内信件


你给的信息不够，至少得说说这两个蛋白的标签是什么吧，比如
Flag, HA, 或者myc什么的。既然你用proteinA/G，你应该还加了一种
抗体可以把两个蛋白中的一个拽下来吧？
背景高倒是很常见，因为非特异性的结合会比较严重。要做得好，
被首先拽下来的蛋白的tag要比较好才行，而且如果用多次串联的TAG
会比较好，比如6XFLAG。也有人用两种不同的TAG串联在一起，通过
两步纯化来增强特异性。另外就是最好直接用抗体共价耦联的琼脂凝胶(
比较贵，1ML可能要五百多刀)。
还有就是，一般的做法是直接把洗过的beads 直接用sample buffer
煮。这样的样品非特异性的成分会不少，但如果用TAG peptide的溶液
冲洗蛋白(比如anti-flag matrix 用flag peptide 来冲洗)，效果会好很多。
没信号也许是因为缓冲液太强，或者是因为两个蛋白结合太弱，
冲洗过程中脱落了。用crosslinker可能会有所帮助。

【 在 hehehehe (hehe) 的大作中提到: 】
: 把两个蛋白转到293细胞里去，然后做Co-IP，用proteinA/G。但每次不是背景太高，就是
: 没信号。请牛人介绍一下Co－IP的注意事项，多谢了。


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※ 来源:．The unknown SPACE bbs.mit.edu．[FROM: 129.49.]