发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: Re: Purify protein from mammalian cells
发信站: The unknown SPACE (Tue Apr 22 22:53:32 2003), 站内信件


让我猜一猜，你是想用类似CO-IP的方法把与某个蛋白有相互
作用的其他蛋白找出来把？
一般来说只要你纯化出来的蛋白跑SDS-PAGE后银染之后能看见
条带就行了(至少纳克级)，就可以把胶送去做质谱了。建议你从
最简单的10厘米直径培养皿养细胞开始试起。可以多养几盘，如果你
觉得蛋白量不够。不过不要一下子就想用成升成升的悬浮培养，：-)
会很麻烦的，你又不是想长晶体。
做悬浮培养最常见的是CHO细胞。养这种细胞的技术很成熟了，
还有专门的无血清培养悬浮CHO细胞的培养液卖。随便问一个做tissue
culture的人都会知道的。
前面有人说用bioreactor.其实连这个都不用，用那种有磁转子的
培养瓶(体积大概是一两升)，或者滚瓶都可以。


【 在 windysea (神仙眷侣~我怀念你爱上我的第一天) 的大作中提到: 】
: Anyone has some idea how much cell culture I need?
: I want to look for protein partners from mammalian cells by affinity
: purification and then mass spec.
: Can null cells greatly increase purification efficiency?
: I wonder if there are mammalian cell lines that be cultured like bacteria in
: suspension in flask!


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※ 来源:．The unknown SPACE bbs.mit.edu．[FROM: 129.49.]