发信人: fever (葡式蛋塔), 信区: Biology
标 题: 大家再来个PVDF western大讨论好吗？
发信站: The unknown SPACE (Wed May 21 13:53:19 2003) WWW-POST

还在与PVDF战斗中，再次请教有经验的虾们：

终于看到了条带，但是巨多非特异带，比我要的带都强得多。在网上查到多家western系
统的trouble shooting，里面提到的好几条关于high background的建议让我大开眼界，
又困惑非常，因为矛盾很多：

1. 关于tween的使用：有一家建议blocking之后才用tween，否则tween会stick to the
membrane and cause high noise；但很多常规方法都没有提到这一点。
2. 关于blocking reagents和ab incubation buffer：有说dry milk能reduce
sensitivity，所以如果只用在二抗incubation就能很好降低noise，但也有很多全程用dr
y milk的，也有说dry milk与tween联合使用会提高noise的；有说BSA会造成高背景的，
也有说用BSA可以获得理想信噪比的……
3. 关于ponceau s染色：这次为确证transfer有效，用了ponceau s染色，但发现有资料
说ponceau s就算洗干净也会造成杂带。

基本已晕菜，期待各位能交流一下实际经验教训。//bow


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※ 来源:．The unknown SPACE bbs.mit.edu．[FROM: 35.10.]