发信人: yxk (proxy2.ytht.net), 信区: Biology
标 题: Re: purpose of DMSO in cell freezing
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Sat Sep 20 19:39:01 2003), 站内信件

（三）、组织细胞的保存：
为了防止因污染或技术原因使长期培养功亏一篑，考虑到培养细胞因传代而迟早会出现
变异，有时因寄赠、交换和购买，培养细胞从一个实验室转运到另一个实验室，最佳的
策略是进行低温保存。这对于维持一些特殊细胞株的遗传特性极为重要。现简要介绍深
低温保存法(－70℃—－196C)的特点。
细胞深低温保存的基本原理是：在－79C以下时，细胞内的酶活性均己停止，即代谢处于
完全停止状态，故可以长期保存。细胞低温保存的关键，在于通过0C-20C阶段的处理过
程。在此温度范围内，水晶呈针状，极易招致细胞的严重损伤。用电镜观察，可见细胞
的核膜上有大量针尖样小孔。
生化研究发现，在此温度范围内，钾离子和钠离子集聚在细胞两侧，具有细胞毒性。因
此，为了避免0C——20C冰晶的形成和细胞膜两侧离子平衡的破坏，需要加保护剂。目前
常用的保护剂有甘油和二甲基亚矾(DM50)，它们可降低冰点，在缓慢的冻结条件下，能
使细胞内水分在冻结前透出
细胞外。贮存在-130C以下低温中能减少冰晶形成，DMSO和甘油对细胞无毒性，分子量小
，溶解度大，易穿透细胞，使用浓度范围为5％—15％，一般常用10％。
为了保持细胞最高的存活率，一般采用慢冻快融的策略。标准冷冻速度以13℃／分的速
度下降，当温度达—30C时，下降速率可增至15C—30C／分，到达-100C时则可迅速浸入
-196℃的液氮中。要适当掌握下降速度，过快将减少细胞水分透出，太慢则易促进冰晶
形成。
复苏细胞时，可将细胞取出后立即投入37C-40C水溶化冻融，迅速通过细胞最易受损的
-50℃。此时细胞仍能生长，活力不受任何影响。


【 在 yxk (proxy2.ytht.net) 的大作中提到: 】 : 防冻吧？ : 【 在 NieFeng (NF) 的大作中提到: 】 : : Hi, all, : : Do anyone know
why it is necessary to add 10% or so DMSO in culture : : medium to freeze cells for future use? : : NF
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※ 修改:．yxk 于 Sep 20 19:41:12 修改本文．[FROM: 81.152.]
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