发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: Re: His tag的蛋白质不能纯化， 救命
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu Nov 27 22:34:41 2003), 站内信件



跑跑western，用anti-His-tag 抗体看看有没有蛋白。另外Ni-NTA与his-tag
的结合非常不特异。你biacore的结果其实不可信。
很难相信300mM的imidazole还洗不下来.我觉得要么是根本没有蛋白表达
，或者没结合上去。如果是后者，你检查一下你的Ni beads是不是好的。


【 在 aoc (大风(羽扇纶巾)) 的大作中提到: 】
: 一个30k的蛋白质，前有his patch,后有6 his tag. 质粒测序没有问题，IPTG诱导有新的
: 条带出现，大小也对。 细胞裂解液也可以binding到Biacore的NTA芯片上，说明有His 的
: 。 可就是不能纯化。要么有很多contamination,要么连需要的条带都没有。 请大家提提
: 建议。
: 会不会是binding太强了，洗不下来？我用的是300mM IMIDEZOLE在pH 8.0。有这个想法是
: 因为在biacore是观察，这个条件不能使NTA芯片再生。


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