发信人: ddlee (网蛋), 信区: Biology
标 题: Re: 细胞传代求助
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Sat Mar 20 00:02:19 2004) WWW-POST

Trypsin, pepsin 等对LH receptor影响不大{Gospodarowicz 1973}. 所以也可能是其它
的一些原因：cells condition, monolayer overlapping之类的问题.当然commercial
trypsin function本身就比较复杂，有时有些人就用较纯化或重组的trypsin和胶原酶之
类成份确定的混合物去消化。

我的感觉是你是否让你的宝贝细胞刚长得90%confluence后，hanks washing triple,再用
0.05%trypsin在不同温度（Rm, 36）消化一下看有没有提高。

实在不行就定些Cell Dissociation Buffer or Enzyme Free Dissociation
Reagents(60% confluence)，但我总认为是花拳秀腿，但也许就对你的实验管用。

另外培养界面，polypropylene, glass, teflon-coated 都是option,但我对这些不熟悉
。可能还有几个较流氓的方法，冰水超声,内置tiny cover slides, 瞬时低渗液, you
name it:)




【 在 lhrh (never ever) 的大作中提到: 】
: ovarian tumor cell line EFO-27
: LH recpetor
: (luteinizing hormone)
:
:
: 【 在 ddlee (网蛋) 的大作中提到: 】
: : Cell type & receptor details, Pls.
: :
: : 【 在 lhrh (never ever) 的大作中提到: 】
: : : 我养了一个tumor cell line,贴壁很牢，按Protocol要求，20min
Trypsinization才
: 下
: : 来
: : : 。
: : :
: :
:
我用此细胞作膜上受体试验，发现检测不到受体，觉得可能是被Trypsin消化了；Scraper
: : : 也试过了，对细胞伤害很大。
: : :
: : : 那位高手有养细胞的经验，指点一下吧。
: : :
: : : 谢谢
: : :
: :
:

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