发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: Re: Question about immunofluorescence
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Tue Jun 15 23:38:29 2004), 站内信件

It is OK! Actually that's the whole basis for FACS analysis.
The point of fixation is not to denature the protein. It just
crosslinks the proteins and make the organelle structures stable in
a cell.
The antibodies used in IF are usually raised against antigen
in its native structure.


【 在 bewithu (x-fire in the sea) 的大作中提到: 】
: Thank u very much for ur valuable info, Royluo
: But will the first antibody bind to the target protein on cell memebrane
: before fixation, noting that the the proteins are not denatured yet?
: thank u.
: 【 在 royluo ( 罗马情结) 的大作中提到: 】
: : 用直接耦连荧光染料的二抗好了。我用过Molecular Probes的Alexa568, 488的
: : 羊抗鼠和兔的二抗，效果都很好，没有明显非特异性结合。
: : 用paraformaldehyde或者甲醇固定细胞的时候，多少会破坏一点膜结构，所以
: : 即使你不用detergent,抗体一样会进到细胞里。用detergent，抗体染得会好一些。
: : 如果你想用一种抗体只与膜蛋白结合，最好在固定细胞之前就用抗体处理细胞，
: : 然后再固定，加二抗。


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