发信人: whlist (windy), 信区: Biology
标 题: Re: 谁熟悉tet on/off system，请指点一下
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Thu May 19 09:46:12 2005) WWW-POST

早有了，发在EMBO report. 我手头就有从他们实验室要来的质粒pTER+.

【 在 smallbite (小咬) 的大作中提到: 】
: 我现在计划建一个inducible RNAi的细胞系。从Invitrogen买了
: 带inducible H1 promoter的vector,叫pENTR/H1/TO,该Vector含
: 一个改造过的H1 promoter,这个promoter中有两个TetO序列，刚
: 刚好夹住TATA box,大致结构如下
:
: TCCCTATCAGTGATAGAGA C TTATAA G TCCCTATCAGTGATAGAGA
: ------------------- ~~~~~~ -------------------
:
: 下划线是TetO序列，波浪线标出的是TATA box。
:
: Invitrogen kit同时包括另一个vector叫plent6/TR，用来表达
: Tet repressor蛋白，当Tet repressor结合到TetO序列上时，就
: 会Block这个H1 promoter,加入Doxycycline能使tet repressor从
: TetO上脱离下来，H1 promoter又可以开始转录。从而实现tet on
: RNAi。
:
: 我的问题是，我现在有表达rtTA的cell line，如果我把Invitrogen
: 的这个inducible H1 promoter引入到rtTA cell line中会发生什么
: 情况？
:
: 我的想法是：rtTA是一个包括tet repressor的
: chimeric protein，在doxycycline存在的情况下它应该也能结合到
: TetO序列上，由于两个tetO紧紧夹住TATA box，我猜这个结合应该会
: 阻止H1 promoter的转录，从而实现一个tet off RNAi.
: 虽然rtTA对TRE promoter来说是一个activator。对Invitrogen的inducible
: H1 promoter应该是一个blocker。
:
: 我这个想法对不对，请熟悉transcription的同学指点一下，多谢了！
:


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