发信人: x5182 (某某某), 信区: Biology
标 题: Re: 各位有人养过primary cell并且做成cell line吗?
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Nov 16 22:57:53 2005)

如果说详细一点估计你们得一点一点逼问:-)
我来这边以后很久没有写东西了，所以一写东西一定丢三落四的。

原代细胞的分离没有组织都有些不太一样，就肝来说，我们是用胶原酶II（SIGMA），
动物麻醉以后在体分离，先是灌流液冲洗掉血，方向是从下腔静脉入肝端到门静脉，
下腔静脉的出肝端封闭，消化液走同样的通路，消化合适以后剪下肝脏就可以分离到细胞
。
别的脏器没有碰过，不知道。

分离出来的细胞我们是种在用胶原蛋白（自制）预先处理过的培养皿里或者是多孔板，
细胞能够存活多久和不变异很大程度依赖于MEDIUM的成分，以及所用的培养板，
所以我们所用的培养液配方很复杂。

另外我用过从一个公司买来的人肝细胞，他们用了MATRIGEL，而且很厚的一层，
细胞基本上就是被包在里面了，这样处理的细胞好象VIABILITY很高，
MEDIUM的也不要求复杂，这里面的窍门我就不清楚了，
（我只知道大量的MATRIGEL对提RNA不太好）

细胞转化不是我做的，只知道大概就是他用了上面说的KIT，按照说明做就可以，
效果很好，转化以后大概三天，我们就看到很多的细胞在开始疯长，
而且形态也有变化，原代细胞比较大，时间久了以后就开始死，但是转化以后的细胞
个子小，开始大量生长，所以后面基本上没有什么筛选的事情，反正没有转的都死了。

转化以后的细胞很容易长，所以我试过很多种MEDIUM，包括DMEM HG加10%FBS以及抗生素
，
MEM，10%FBS，这些它都可以长，而且在形态上面也没有再变，基本上可以按照HepG2的
配方来养。

我们这样转化以后的细胞只是粗略的做了一下鉴定，比如说测了白蛋白，确认是肝细胞，
做了BETA-CATENIN，确认是癌变细胞。没有进一步的做下去。



【 在 ader (阿德) 的大作中提到: 】
: TARGETRANSECT这个词很rare啊，goooooooooooooooooogle都没结果耶。
: 拜托某某帮忙说详细点。具体的kit?
: 另外，原代肝细胞永生化以后形态有没有改变？



--

※ 来源:·BBS 未名空间站 http://mitbbs.com·[FROM: 24.205.]