发信人: ysx (hi), 信区: Biology
标 题: Re: 请教一个关于mass spectrometry的问题
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Nov 17 21:05:52 2005)

首先一个问题是你是否知道这是一个什么蛋白(需要知道它的序列,是否知道它可能的磷酸
化位点), 然后就是经过1D分离后, 是不是很纯. 如果这两个问题都是, 较容易. 可以进
行
胶内酶切,然后提取peptides, you can get PMF using MALDI-TOF. 比较你所得到肽的分
子量, 与理论分子量. 如果你发现一个加80的峰,这可能是一个磷酸化的肽. 你可以在反
射模式下, 收集一次谱图. 如果是S,T磷酸化, 你可以看见这个峰丢失一个98的峰. 如果
你想知道是在哪个aa上加一个磷酸化, 需要做MSMS. 如果不知道是什么蛋白, 只有做MSMS
了. 最后说明一下, 磷酸化相对来说,难检测. 你需要用尽量多的蛋白, 还要考虑你蛋白
的磷酸化程度, 所在肽的序列. 如果lucky, 非常容易解决.
【 在 kaye (@_@~勇敢的海豚~蓝色) 的大作中提到: 】
: 我有个蛋白跑在胶上想切下来准备分析是不是磷酸化过。有没有mass spec的专家
: 在这里把流程简单讲一下，还有mass spec如何精确多肽的分子量到什么程度等？
: 多谢多谢，就需要一个quick lesson!



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