发信人: happylittle (吃辅食了，晚喂一秒钟就急得直哼哼。), 信区: Biology
标 题: Re: 为啥RNA的transcription老是重复性不好
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Apr 9 12:50:43 2006)

我们不用kit，酶也是homemade的，所以要求更高一点吧。RNAsin当然也是加的，所以LZ
同时别忘加DTT，否则RNAsin反而有害。结果和你也差不多，32P标记的一两分钟内可以看
到明显条带。我们实验室还有很多勤俭持家的传统，从来没有用过pre-cast胶，缓冲液都
自己配，刚进实验室那两年连DNA序列都自己测，呵呵。同学觉得我特痛苦，我自己习惯
了，不觉得。

【 在 Cajal (chump) 的大作中提到: 】
: 用过ambion的Maxiscript或Megascript没有？用这两种试剂盒我好像从来不需要小心先
加
: 哪个后加哪个的问题，更没有要飞快的赶着把试剂加完（当然，我也没有干过加了几个
试
: 剂停下来去干别的事，有牛人是这么做实验的么？）这个试剂盒要求模板量要达到一微
克
: ，所以做实验前是要测模板浓度，此外我每个反应都另加一微升RNA酶抑制剂（这个在
试
: 剂盒说明书没有要求），invitrogen的RNaseOut或Promega的RNAsin应该都可以。37度
一
: 小时后的产量够在胶上一分钟内出现非常强的信号，当然，我是说P32的购买时间在两
周
: 内。
: 我用的模板是先克隆到一个质粒里面的，用之前只拿酶切了模板3'那一端，保证转录到
切
: 开处终止就行了，没有把启动子那头也切出来，也用不着考虑必须切成5' overhang的
问
: 题。
: ...................



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