发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 生命之初---CSH小鼠分子胚胎课侧记（六）
发信站: BBS 未名空间站 (Sat Jul 8 23:15:36 2006), 转信


　本文献给YL

（六）Uterus/womb/matrix

　我们这个课程设备比较先进，演示试验用的显微镜都接了摄像头，跟一个三十寸的液
晶大电视相联。所以老师演示什么实验，我们是看得一清二楚。负责演示子宫冲洗（
uterine flushing）和胚胎子宫转移（uterine transfer）这两个实验的是Michael Shen
。他做起来倒是轻车熟路，干净利落，让人觉得好像只是小意思而已。但我心里十分紧张
，因为我在本科的时候动物实验就是稀里糊涂的，到美国几年更是最近两个月才做点最简
单的动物实验，不知道自己能否挺过去。但是紧张也没用了，只有硬者头皮上了。

　第一个实验是子宫冲洗（uterine flushing）。首先是怎么将老鼠开膛破肚。这一步
比较简单。把老鼠头颈脱臼处死之后，腹面朝上，喷些70%乙醇，用纸巾把脱落的毛擦掉
。然后如果是按Michael的办法，就是在老鼠腹部沿着头尾中线的方向把皮肤剪开一个小
口，然后用手把这个小口向两边撕开，这样被肌肉层包裹的整个腹腔就可以看得见了，然
后就是把肌肉层剪开，露出腹腔的脏器。Ann Mclaren喜欢的办法，是在老鼠腹面头尾中
线的中点处切开一个跟中线垂直的小口，然后用手把这个小口向头尾两边用力撕开。这样
一来，小鼠的整个身体都被剥皮了，只要剪开肌肉层就可以了。

将老鼠开膛破肚以后，下一步就是找到子宫了并把子宫分离出来了。小鼠的子宫是一
个“V”形的对称的管装结构。大概位于腹腔中偏背部的位置。子宫分叉的两部分称为子
宫角（uterine horn）。两个子宫角分别与左右两侧的输卵管以及卵巢连在一起。有意思
的是卵巢的脂肪垫（fat pad）将两侧的肾脏和卵巢又连在了一起。所以找到子宫的诀窍
就是找到肾脏。两个子宫角在靠近老鼠尾部会聚在一起，称为子宫颈（cervix）。子宫颈
则通往阴道。找到子宫颈比较容易，因为膀胱和子宫颈在一个位置，而膀胱很容易找到。
打开腹腔之后，首先看到的是乱七八糟一堆肠子，以及靠近头部方向的好几片肝脏。我的
经验是，如果你过去完全没见过子宫是什么样的，最好先找小鼠的左子宫角，然后顺藤摸
瓜找右子宫角。为什么要这样找呢？因为小鼠的胃和脾脏都在左侧，比较容易辨认，而左
边的肾脏就埋在胃的下面（以腹面朝上），且靠近脾脏。实际操作起来很简单，首先把小
鼠的肠子尽量往小鼠的右边扒开，露出胃，然后用镊子翻开胃，找到肾脏。找到肾脏之后
，卵巢，输卵管和子宫角就一目了然了。我对小鼠的解剖构造不是很了解，所以第一次解
剖找子宫时糗了一把，把胃认成了肾。当然以后这个错误再也没犯过，而且可以几秒钟之
内就把子宫给分离出来。我这里强烈推荐一本介绍小鼠解剖构造教材的网络版，有兴趣的
同学可以去看看http://www.informatics.jax.org/cookbook/。

子宫角有一侧附着有腹膜（mesometrium），有很多血管和脂肪组织，比较脏，需要
在冲洗子宫之前去掉。这时左手用镊子把子宫角拉起来，露出腹膜，然后用解剖小剪刀把
腹膜组织尽可能的剪掉。接着就在靠近子宫与输卵管接口处剪断，并把左子宫角拉出来，
露出子宫颈。下一步要在子宫颈剪一刀，把子宫和阴道分开。此时比较重要的是不能把左
右两个子宫角也剪断了，这是因为子宫颈开口比较大，冲洗用的针头需要通过子宫颈插入
子宫角。下一步就是分离右子宫颈，步骤跟前面说的一样。分离子宫上面可能会有不少血
污，所以可以短暂的在干净的kimwipe纸巾上放一下，吸掉这些脏东西。

将分离的子宫放在35mm或者100mm培养皿的盖子上，然后就可以在解剖显微镜下进行
冲洗了。这里之所以用培养皿的盖子还不用培养皿本身是因为培养皿盖子的盖沿非常浅，
便于操作，这是我总结出来的经验。冲洗之前首先应该把显微镜调成暗视野，这样乳白色
的子宫更清楚一些。用来冲洗用的工具是26～30 gauge针头和一毫升的针管。操作之前针
头必须在砂纸上磨钝，否则很容易把子宫刺破。我们用来冲洗子宫用的培养液是M2，每个
子宫角大概需要三四百微升的M2 media来冲洗。冲洗过程本身看起来很简单，就是把针头
通过子宫颈插入子宫角。前面我提过，子宫颈开口比较大，所以只需要非常轻柔的用针头
去试探子宫颈口就可以，针头往往很容易进去。这里千万不能用蛮力，否则一旦把子宫戳
破了，就很难找到子宫的通道了。我第一次做的时候非常弱，把子宫颈部戳的稀烂，所以
最后根本不知道针头是否进入了子宫管道结构里面，然后就胡乱冲洗一下，居然还拿到了
两三个囊胚。后来我就学乖了，用针头非常轻的试探子宫颈口，插入之后进入到一个子宫
角。然后再用镊子把针头插入的子宫部位和针头一起夹起来，防止注射的培养液反冲出来
。下一步就是注射培养液了。注射的瞬间，你会发现整个子宫角会突然膨胀起来，并且变
的透明一些，这就说明冲洗成功了。接着再冲洗另一个子宫角。冲洗完之后把子宫扔掉就
可以开始找冲洗出来的囊胚了。

囊胚只有针尖大小，直径还不到一百微米，必须用解剖显微镜才能观察到。子宫冲洗
出来的绝大部分是脂肪滴之类的脏东西。不过根据我的经验，这些杂质并不容易和囊胚弄
混。因为首先囊胚是沉在底部的，一般杂质则是浮在液面上，如果轻轻晃动一下容器，囊
胚只会轻轻的扰动少许；其次，囊胚的折射比较特别，在显微镜下看特别晶莹剔透，十分
好看。

找到囊胚之后，下一个问题就来了，囊胚这么小，怎么才能方便进行转移呢？　


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