发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: 生命之初---CSH小鼠分子胚胎课侧记（七）
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Jul 11 23:08:27 2006), 转信



　本文献给YL

（七）口吸管和蓝珠子

上一篇提到子宫冲洗出来的囊胚只有针尖大小，要想方便快速的转移囊胚需要用一种
特殊的工具叫做口吸管（mouth pipette）。在我的印象中，不能用嘴吸溶液是从中学就
开始强调的常识。所以刚开始用这个工具时感觉特别新鲜。课程结束后，我还把自己用的
口吸管带了回来，算是纪念品。

口吸管的结构很简单：首先是一端拉细了的毛细玻璃管，这个毛细玻璃管通过一个接
头固定在一个硬塑料管（直径大概半个厘米，长大概四五个厘米）上；硬塑料管的另一边
接着一条长大概半米的软塑胶管；最后软塑胶管另一头接着一个硬塑料的吸口。

口吸管结构中最重要的是用来吸取胚胎的毛细玻璃管。要实现精细的控制囊胚的吸取
和喷出，毛细玻璃管的直径应该稍大于囊胚的直径，但又不能太大。上一篇提到囊胚的直
径大概是一百微米左右，而一般的毛细玻璃管直径却有1.5毫米，很显然必须拉细毛细玻
璃管才能使用。拉毛细玻璃管的过程很简单，首先用酒精灯的火焰烤融毛细玻璃管的中间
位置，然后把两头向相反方向用力一拉，形成一个细丝。然后把拉细的部分按在大姆指上
，用指甲把拉细的部分给压断。这样就做成了两个开口平整，一头细一头粗的吸管。按道
理拉细的部分直径最好是两百微米左右，但根据我的经验如果只是一般的转移一下囊胚，
三四百微米粗的吸管也可以用。可以想象的是，吸管这么细，非常脆弱，很容易折断，所
以最好一次做个上十个备用。顺便提一下存放这些吸管的办法。揉一个橡皮泥棍子，放在
15厘米的大培养皿里面，然后把吸管水平的粘在橡皮泥棍子上，这样既好拿，又不会弄脏
吸管。

操作的时候把吸口叼在嘴里，一手拿着硬塑料管，同时用显微镜观察囊胚就好了。起
初我怀疑操作起来可能很麻烦，因为觉得吸上了囊胚之后就得用嘴继续含着吸口防止液体
又洒出去。事实上这个担心根本没有必要。因为拉细的一端毛细管作用非常明显，一旦吸
上一些液体后，这些液体就定在那里了。只要不用嘴吸或者吹，囊胚是掉不出来。所以吸
了一些囊胚之后，嘴完全可以松开吸口说话什么的，甚至把整个口吸管放在实验台上也可
以。

有洁癖的同学可能会觉得这种口吸管很脏，那么怎么保证口吸管吸口一定干净呢？这
一点没有人教，但是我总结出来了一个办法，就是在不用的时候把口吸管挂在显微镜的目
镜上。这样吸口悬在空中，要弄脏也很困难了。同时要用口吸管的时候往往是在显微镜下
操作，所以放拿都很顺手。

由于绝大部分学生没有用过口吸管，主讲老师要我们首先用一种蓝珠子来练习。这种
蓝珠子大概是Biorad卖的Affi-blue beads，本来是用来纯化蛋白用的，由于直径和囊胚
的直径很相似，用来模拟囊胚再好不过了。这种蓝珠子一方面用在练习中，另一方面可以
用作参照物来确定吸管的直径合乎要求，所以挺有用的。

上一篇提到子宫冲洗出囊胚，下一步就是要把这些囊胚转移到干净的M2培养液中洗干
净。这里有一个问题。囊胚这么小，如果放在一个盛满培养液的培养皿里，一下子就找不
到了。所以方便的办法是在一个培养皿里面准备数个五十微升培养液的液滴，把囊胚转移
到这些液滴里就很好找了。由于这些液滴很容易变干，所以必须倒入矿物油覆盖这些液滴
。

用口吸管转移胚胎到液滴的一个大忌是吹进气泡。因为吸管很细，一吹进气泡就是一
大堆小气泡，往往会覆盖整个液滴，挡住视线。这些气泡很麻烦，因为基本没有可能去掉
，所以只能凭感觉用口吸管伸到气泡下面把囊胚吸出来。我们一开始做的时候不少学生都
犯了这个错误，所以弄得很麻烦。其实要解决这个问题也很简单，就是在吸囊胚之前，先
吸一点液体，这样不至于在吹出胚胎的时候，也吹出气泡。


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