发信人: tiangeng (田大榜), 信区: Biology
标 题: Re: 请教一个ligation的问题
发信站: BBS 未名空间站 (Wed Dec 7 16:16:58 2005), 转信

这个我前一段做了不少.和一般一个片段的insert的ligation一样.
只是把一个片段的体积分给两个片断.
比如:
一般是
7ul insert + 1ul vector + 1ul buffer + 1ul 酶
改成3.5+3.5+1+1+1
成功率和一个片断的一样.
可能是用的酶比较好使.
两头是BamHI和EcoRI,中间是XhoI或者SalI对XhoI的.
我的片段两个加起来是2.1kb
【 在 windysea (甜心小猪~祝福我们的宝贝小雨瞳) 的大作中提到: 】
: 用三个不同的restriction enzymes,
: 把两个pcr fragments接到vector上，
: 如果一次性地做ligation (mix 3 fragments in 1 reaction), efficiency怎样？



--

※ 修改:·tiangeng 于 Dec 7 16:23:04 修改本文·[FROM: 129.49.]
※ 来源:·BBS 未名空间站 mitbbs.com·[FROM: 129.49.]