发信人: royluo ( 罗马情结), 信区: Biology
标 题: Re: 蛋白电泳commassie染色后还可以转膜做western吗
发信站: BBS 未名空间站 (Sun Jan 8 20:28:14 2006), 转信


excellent question!
是这样的，transfer buffer 和 commassie staining buffer里面的
methanol 含量不一样，用途也不一样。commassie staining有将近
40%的 methanol, 用来强力的置换出SDS，原因在于commassie dye
是通过疏水相互作用来染蛋白的，如果不去掉SDS，对染色会有干扰。
　transfer buffer的methanol只有20%，浓度低好多，所以对SDS的置换
不是那么强。western 膜往往是NC 或者是PVDF,上有大量孔状结构。
这些膜在干燥情况下，非常疏水，如果直接泡在没有有机溶剂的buffer里面，
这些buffer根本无法进入这些结构，所以蛋白也转不上去。Methanol非常疏水，
但又和水互溶，所以起了个中介的作用，让buffer能够充满western 膜的
这些孔状结构。这里强调一点，虽然transfer buffer里面的methanol不多，
但是还是会有置换作用，所以转膜之前不宜把胶在transfer buffer里面泡
太久。
如果你对更多细节感兴趣，可以查一下以下这本书。

"Gel Electrophoresis of Proteins: A Practical Approach",
IRL Press Ltd., Oxford (1981).



【 在 misssun (大笨熊) 的大作中提到: 】
: 可是转膜的buffer里面也含有大量的MeOH，这又作何解呢？



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