发信人: foxedgehog (edible), 信区: Biology
标 题: Re: 问个anneal linker的小问题
发信站: Unknown Space - 未名空间 (Sun Nov 7 18:52:08 2004) WWW-POST

You don't need kinase if the vector/fragment the linker is ligated to has 5'p
on its end, which usually is the case. When you use restriction enzyme to
generate the new end from the linker, you also generate the 5'p on the end. I
think people who are using kinase are ligating oligos to de-phosphorylated
vector etc, in that case you need to add 5'p to your annealed oligos.


【 在 victorjenny (victor) 的大作中提到: 】
: 我的经验和你们讨论的怎么不一样？
:
我以前anneal以后直接用来做连接，从来没有问题。而且anneal过程中我没有加过kinase
: ，倒是加了kinase buffer.
:
: 【 在 zzzzh (一切靠自己) 的大作中提到: 】
: : 他的那个意思就是第二步嘛,呵呵
: : 【 在 ahche (啊且) 的大作中提到: 】
: : : annealing is anealing
: : : kinase is kinase.
: : : two steps lah
: : : first one doesn't need ATP
: : : second one need
: : : 【 在 zzzzh (一切靠自己,要坚强) 的大作中提到: 】
: : : : but the kinase is to add 5'-P for cloning
: :
: :
:


--
※ 来源:．Unknown Space - 未名空间 mitbbs.com．[FROM: 67.171.]